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非洲猪瘟病毒实时荧光 PCR 检测试剂盒说明书

更新时间:2018-12-29      点击次数:5032
非洲猪瘟病毒实时荧光 PCR 检测试剂盒说明书【兽药名称】通用名:非洲猪瘟病毒实时荧光 PCR 检测试剂盒商品名:无英文名称:African Swine Fever Virus Real-time PCR Detection Kit汉语拼音:Feizhouzhuwen Bingdu Shishiyingguang PCR Jianceshijihe【主要成分与含量】产品组份规格(48 头份/盒) 样品裂解液3 管(4 mL/管)荧光 PCR 反应液1 管(1.2 mL/管)阳性对照1 管(500 μL/管)阴性对照1 管(500 μL/管)说明书1 份【作用与用途】 用于猪全血、血清、淋巴结、脾脏、肌肉等样本中的非洲猪瘟病毒的检测。【用法与判定】1用法1.1样品采集1.1.1全血:直接取动物新鲜血液 200 µL 备用。1.1.2组织样品:取脾脏、淋巴结、肌肉等组织约 1 g,剪碎后取 0.1 g 进行充分研磨,随后加入 1.5 mL 生理盐水进行匀浆,将此样本转移至 1.5 mL 离心管中,8000 g 离心 2 min, 取上清液备用。1.2样品处理1.2.1取需要数量的离心管(需设置阳性对照及阴性对照),均加入样品裂解液 190 µL;1.2.2分别加入采集的待检样品(全血、组织样品等)、阳性对照、阴性对照各 10 µL,充分混匀;1.2.3瞬时离心,取上清液备用。1.3PCR 操作步骤1.3.1取出试剂盒,从中取出实验所需试剂,融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着的液体;1.3.2在各 PCR 管中分别加入 20 μL 荧光 PCR 反应液,转移至样本准备区;1.3.3分别加入 1.2.3 步骤获得的上清液 5 μL,混匀,瞬时离心,转移至检测区;1.3.4将各 PCR 管放置在仪器样品槽相应位置,并记录放置顺序;1.3.5按下表设置仪器核酸扩增相关参数,进行 PCR 扩增。 体系25 μL 反应体系信号通道FAM 通道采集荧光信号。PCR反应条件阶段条件循环数预变性95℃ :3 min1PCR95℃ :10 s4060℃ :20 s2结果判定2.1实验成立条件2.1.1阳性对照:Ct 值≤30,有明显指数增长,呈典型的 S 型曲线。2.1.2阴性对照:Ct 值>38 或无 Ct 值,无明显指数增长期和平台期。2.2判定标准2.2.1阳性:样本检测结果 Ct 值≤33,有明显指数增长,表明样本中检测出该病毒。2.2.2可疑:样本检测结果 Ct 值在 33~38 范围,应对样本进行复检。如重复实验结果 Ct 值仍在 33~38 范围,有明显指数增长,则判定为阳性,否则为阴性。2.2.3阴性:样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值,表明样本中未检测出该病毒。【注意事项】(1)实验前请仔细阅读本试剂盒说明书,严格按操作步骤执行。(2)所有试剂应在规定的温度储存,详细信息见试剂标签。(3)为了避免交叉污染,请尽可能在无核酸酶的环境下操作,并将试验过程分区进行(样本准备区、扩增检测区等)。(4)配制 PCR 反应体系时应尽量避免气泡产生,扩增前应检查反应管是否盖紧,以免反应液泄漏污染仪器。(5)本试剂盒可搭配标准核酸提取方法进行样品检测,Ct 值等判定参数不变。(6)为保证实验结果准确,样品应为新鲜采集,2-8℃运输,长途运输请使用干冰。(7)所有试剂应避免反复冻融。【贮藏与有效期】 ﹣20℃冷冻避光贮存,有效期为 12 个月。【规格】 48 头份/盒

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